免疫組化結(jié)果需結(jié)合染色強(qiáng)度、陽性細(xì)胞比例及組織定位綜合判斷,主要觀察指標(biāo)有陽性標(biāo)記物表達(dá)水平、陰性對照有效性、組織學(xué)背景一致性、臨床病理相關(guān)性、技術(shù)質(zhì)量控制。
陽性標(biāo)記物的染色強(qiáng)度分為弱陽性、中度陽性和強(qiáng)陽性三級,需與陰性對照比較。細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核的特異性著色具有診斷意義,如ER陽性乳腺癌細(xì)胞核出現(xiàn)棕色顆粒為典型表現(xiàn)。不同抗體陽性標(biāo)準(zhǔn)不同,如HER2免疫組化3+為強(qiáng)陽性膜染色且占比超過10%。
陰性對照組織應(yīng)無特異性染色,內(nèi)對照如正常上皮需顯示預(yù)期染色模式。若陰性對照出現(xiàn)非特異性著色,可能因抗體濃度過高或組織固定不當(dāng)導(dǎo)致,需重新優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。內(nèi)源性過氧化物酶阻斷不徹底可造成背景染色干擾判斷。
陽性信號需與形態(tài)學(xué)特征吻合,如CD20應(yīng)限于B細(xì)胞膜表達(dá)。異常定位如細(xì)胞角蛋白在淋巴細(xì)胞中表達(dá)提示交叉反應(yīng)或假陽性。腫瘤異質(zhì)性區(qū)域需多點(diǎn)觀察,避免因取樣誤差導(dǎo)致漏診。
結(jié)果需與HE染色形態(tài)和臨床病史相互印證,如前列腺癌PSA陽性但臨床無前列腺病變需考慮轉(zhuǎn)移癌可能。多項(xiàng)標(biāo)志物組合解讀更可靠,如GATA3、GCDFP15協(xié)同判斷乳腺癌來源。
組織固定時間應(yīng)控制在6-72小時,過度固定導(dǎo)致抗原丟失。切片厚度宜保持3-5微米,脫片修復(fù)液pH值需匹配抗體要求。每批次實(shí)驗(yàn)應(yīng)包含已知陽性和陰性對照標(biāo)本驗(yàn)證試劑有效性。
獲取免疫組化報告后應(yīng)及時與病理醫(yī)師溝通,重點(diǎn)關(guān)注診斷性標(biāo)志物的具體表達(dá)模式和量化評分。對于臨界值結(jié)果如HER2 2+建議加做FISH檢測,存在技術(shù)疑問時可要求重復(fù)實(shí)驗(yàn)或送第三方實(shí)驗(yàn)室復(fù)核。日常工作中需定期校準(zhǔn)自動化染色設(shè)備,建立標(biāo)準(zhǔn)操作流程減少人為誤差,同時注意抗體克隆號、稀釋度等關(guān)鍵參數(shù)的記錄存檔,便于結(jié)果溯源和實(shí)驗(yàn)室間比對。
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