DNA濃度低可能由樣本采集不當(dāng)、保存條件不佳、提取方法錯誤、樣本降解或疾病因素導(dǎo)致。主要有樣本采集量不足、保存溫度過高、提取試劑失效、核酸酶污染、遺傳代謝病等原因。
采集血液、唾液或組織樣本時,若取樣體積過小或細胞數(shù)量不足,會導(dǎo)致DNA總量偏低。建議使用標(biāo)準(zhǔn)化采樣工具,確保樣本量達到檢測要求。對于血液樣本,成人外周血采集量通常需要3-5毫升。
DNA在常溫下易降解,樣本若未及時置于2-8℃冷藏或-20℃以下冷凍保存,核酸鏈會發(fā)生斷裂。運輸過程中需使用干冰或低溫轉(zhuǎn)運箱,避免反復(fù)凍融循環(huán)破壞DNA完整性。
過期的DNA提取試劑盒或配制不當(dāng)?shù)牧呀庖簳档吞崛⌒?。需檢查試劑有效期,按照說明書比例配制溶液。苯酚-氯仿法等傳統(tǒng)提取方式更易受試劑純度影響,建議改用硅膠膜吸附柱提取法。
實驗環(huán)境中存在的DNase會分解DNA分子。操作臺面需用核酸酶清除劑處理,移液器吸頭應(yīng)選擇無酶型。提取過程中添加EDTA等核酸酶抑制劑可有效保護DNA免受降解。
某些遺傳性疾病如線粒體DNA耗竭綜合征會導(dǎo)致細胞內(nèi)DNA合成障礙。這類患者的外周血白細胞DNA濃度常低于50ng/μL,需通過基因檢測確診。骨髓增生異常綜合征等血液病也會影響DNA產(chǎn)量。
日常檢測中應(yīng)規(guī)范采樣流程,使用無菌無酶耗材,樣本采集后立即低溫保存。實驗室需定期校準(zhǔn)分光光度計,采用熒光定量法提高低濃度DNA檢測靈敏度。對于臨床疑似遺傳病患者,建議進行全外顯子測序輔助診斷,必要時重復(fù)采樣檢測。飲食中補充葉酸、維生素B12等核苷酸合成原料,可能有助于改善某些代謝異常導(dǎo)致的DNA合成不足。
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